분자생물학 혈우병 재조합치료제

분자생물학 혈우병 재조합치료제 [분자생물학] 혈우병 재조합치료제.hwp 목차 1. 혈우병(hemophilia) 1.1. 혈우병의 종류 1.2. 혈우병의 증상 1.3. 혈우병의 발생원인 2. 혈우병 치료제 2.1. 혈우병 치료제의 구조-기능의 관계 2.2 Recombination Factor Ⅶa (rFⅦa) 생성방법 2.3. rFⅦa 생성 과정에서 사용된 기술 2.4. 작용기작 2.5. 유전자 재조합 제제가 쓰이는 이유 3. 혈우병과 관련한 현재 동향 3,1, 국내 혈우병 현황 3.2. 혈액응고인자 Factor 7의 현황 4. rFⅦa의 안전성 5. 전망 본문 유전자 library에는 genomic DNA library와 cDNA library가 있다. genomic DNA library는 어떤 개체가 가진 전체 genome 유전자를 적당한 제한 효소로 처리해서 여러 조각으로 자른 다음에 동일한 삽입 부위를 제공하는 제한 효소로 처리한 벡터에 삽입시켜 놓는 것이고 cDNA library는 reverse transcriptase로 mRNA를 전사하여 cDNA를 만들어 벡터에 삽입시켜 놓는 것이다. 그러므로 각 벡터는 서로 다른 종류의 유전자들을 포함하고 있는데 이 중 우리가 찾는 유전자가 들어있는 벡터를 가려내는 것이 library screening이다. Screening에는 항체를 이용한 선별법과 nucleic acid probe를 이용한 선별법이 있다. 항체를 이용한 선별법은 벡터가 들어 있는 박테리아가 증식되어 생긴 colony나 plaque에서 벡터가 가지고 있는 특정 유전자가 발현되어 단백질이 생기게 되면 그 단백질에 대한 항체에 표지를 한 다음 반응시켜 그 항체에 반응하는 colony나 plaque를 찾는 방법이다. 이보다 널리 사용되는 것이 바로 nucleic acid probe를 이용한 방법이다. 이 방법은 염기서열에 대한 정보를 어느 정도 가지고 있어야 하기 때문에 다음과 같은 경우에 이 방법을 사용할 수 있다. 유전자의 일부가 클로닝되었고 이를 이용하여 나머지 부분을 찾고자 할 때, 밀접하게 관련된 유전자가 이미 클로닝된 경우 부분적으로 일치하는 염기서열끼리 상보결합함으로써 원하는 유전자를 찾고자 할 때, 혈액이나 조직으로부터 어떤 단백질을 분리한 후 이것이 기존의 단백질과 다른 새로운 물질로 확인이 되면 우선 분리된 단백질의 부분적인 아미노산 조성을 알아내어 이에 가능한 모든 조합의 oligonucleotides를 DNA 합성기로 합성하여 이를 probe로 사용하고자 할 때가 그 경우이다. 2.3.2. Sequencing (Sanger법) 염기서열을 결정하는 방법으로 DNA polymerase를 사용하는 Sanger법이 가장 많이 쓰인다. polymerase들은 primer가 있을 때 35S나 32P로 표지된 dATP 또는 dCTP와 같은 3가지의 nucleotides를 첨가하여 실온에서 반응시키면 primer를 기점으로 하여 5에서 3방향으로 동위원소로 표지된 DNA를 합성한다. 이 반응을 동일한 4개의 시험관에서 동일하게 진행시키다가 일정시간이 경과한 후에 각 반응 시험관에 해당되는 dideoxynucleotide 중의 하나를 넣어주게 되면 polymerase는 3OH가 없는 ddNTP를 가지고 DNA를 합성할 수 없으므로 정확하게 해당 반응 염기에서 DNA의 합성이 끝나게 된다. 따라서 각 반응액 속에는 말단이 G, A, T, C 중 어느 하나로 끝나는 서로 다른 길이의 DNA 절편들이 무수히 들어있게 된다.이 절편들을 polyacrylamide gel상에서 전기 영동하여 자가방사 기록하게 되면 각 시험관 속의 절편들을 모두 관찰할 수 있고 4개의 반응액에서 나온 결과를 종합하여 전체 DNA 염기 서열을 알 수 있게 된다. 각 염기들은 끝부분이 이미 방사성 동위원소인 35S에 의해 표 본문내용 와 혈우병 B는 각각 혈액응고인자 Ⅷ인자와 Ⅸ인자가 부족해서 발생하는 것으로 X염색체 위에 그 유전인자가 열성으로 존재한다. 따라서 열성 반성유전을 하여 주로 남성에게서 발병한다. 이와는 다르게 혈우병 C는 인자가 부족하여 발생하며 상염색체 중 4번 염색체에 있는 인자가 부족해 나타난다. 그 외에 Ⅴ인자의 부족으로 발생하는 부혈우병, von Willebrand인자의 부족으로 발생하는 가성혈우병(혹은 폰빌레브란드병)이 있다. 1.2. 혈우병의 증상 주 증상은 출혈이 잦고 지혈되지 않는 것이며 혈액 응고인자의 부족이 심화될수록 그 증상이 빠르고 심각하게 나타난다. 출혈 부위에 따라 생명이 위험할 수도 있으며, 주 출혈부위는 조직인자가 적으며 자주 사용하는 관절과 골격근 부위이다. 1.3. 혈우병의 발생원인 1