미생물학 셀룰라아제 활동 측정(Measurement of Cellulase activity)

미생물학 셀룰라아제 활동 측정(Measurement of Cellulase activity) [미생물학] 셀룰라아제 활동 측정(Measurement of Cellulase activity).hwp 목차 Intro Materials Method Questions 1. FPU란? 2. DNS의 원리 3. What is the meaning of pH 4.8 and 50℃ and 95℃? 4. Why do glucose standards needs? 5. What is the difference among 4 groups? 6. explain about necessities of whole steps Reference 본문 3,5-Dinitrosalicylic acid(DNS)는 오직 환원당 하고만 반응한다. 환원당은 알칼리성에서 3,5-dinitrosalicylic acid의 NO2기를 NH2기로 환원시켜적갈색의 아미노생성물을 생성하며, 그 색깔은 일련의 표준물질에 대비하여 측정한다.이 시약은 위험성이 덜하며, 당의 측정 및 비환원당을 환원당으로 가수분해 함으로써 다른 당질 분획의 측정에도 널리 이용된다. 이 색소를 이용하여 비색정량하는 방법으로 조작이 간단하고 신속히 할 수 있기 때문에 많은 시료를 일시에 정량할 수 있다. 예를 들면, 자당(sucrose)을 산 가수분해에 의해 그 환원 단당류인 포도당과 과당으로 분해시킴으로써 자당의 측정에 이용될 수 있으며, 비전분성 다당류로서 식이섬유를 측정하는 마지막 단계에서 최종적 다당류 분획을 환원당으로 가수분해하는 데에도 이용될 수 있다. 3. What is the meaning of pH 4.8 and 50℃ and 95℃? pH4.8: 분해효소의 optimum pH 50℃: incubating temperature로 분해효소의 활성이 가장 높은 optimum temperature이다. 95℃: 위의 DNS의 설명에서 볼 수 있는 적갈색의 갈변을 유도하는 온도이다. 4. Why do glucose standards needs? Cellulose가 cellulase에 의해 분해되어 생성되는 산물은 glucose이다. 수행한 실험의 경우 효소의 농도를 다르게 하여 이에 따른 효소의 cellulose 분해 능력을 살펴보는 것이 목적이다. 이 때 cellulose의 분해 능력을 측정할 수 있는 척도가 분해를 통해 생성되는 산물인 glucose이다. Glucose의 농도는 흡광도를 통해 추정할 수 있는데, 이 때 glucose standard 곡선을 통해서 assay mixtures들의 효소활성을 통한 glucose 생성량을 확인할 수 있다. 이번 실험에서 Glucose standard curve를 이용하여 sample의 glucose 농도를 구하기 위해서는 sample에 추가된 reagent buffer와 control의 OD값을 빼준 뒤 Glucose standard curve의 y축 OD 값을 찾아 그에 대응되는 glucose 농도 값을 역추적하여 x 축에서 찾는다. 본문내용 Union of Pure and Applied Chemistry)의 지침에 나와 있는 방법을 따른 것으로 셀룰레이즈의 활성도를 단위 밀리리터 효소 용액 당 활성화되는 “FPU (filter-paper units)"로 측정한 것이다. 정량적 결과를 도출하기 위해서는 significant conversion과 equal conversion(전환 값)을 기본으로 비교가 가능해야 한다. 50mg의 filter paper(4% conversion)로부터 얻은 2.0 mg의 환원당 값은 FPU 계산의 절편으로 이용한다. 여기에서 유의할 점은 FPU값이 오로지 양적 전환 값으로만 쓰인 다는 것이다. 조제되어 섞여있는 용액으로부터 산출된 효소의 양을 선형적 그래프화 할 수 없으므로 동일한 시간 내에 효소로부터 얻을 수 참고문헌 Reference 논문 -, Tatsuya Fujii 외 4명, Biomed Central 게제 -, Scott W. PryorNurun Nahar, Appl Biochem Biotechnol (2010) 162: 1737-1750 - Pure & App!. Chem., Vol. 59, No. 2, pp. 257-268, 1987. Printed in Great Britain. © 1987 IUPAC 웹페이지 http://www.ncbe.reading.ac.uk/ncbe/materials/enzymes/celluclast.html http://cobweb.ecn.purdue.edu/~lorre/16/research/LAP-006.pdf